【摘要】 目的：对马莲鞍根75%乙醇提取物的大孔树脂柱60%乙醇洗脱物进行化学成分研究。方法：利用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、制备液相等分离手段进行化学成分的分离，再通过核磁共振波谱法确定其化学结构。结果：经分离得到3个化合物均为白色粉末；核磁共振波谱图，确定其为强心苷类化合物，分别为16-O-acetylperiplogenin （1），periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2），digitoxigenin gentiobioside （3），其中，化合物1为种内首分。结论：本方法对马莲鞍的化学成分研究具有较好的应用价值。能应用于马莲鞍的进一步开发。
【关键词】 马莲鞍； 化学成分； 提取分离； 结构鉴定
Chemical Constituents of the Malian Saddle/HU Jing-jing，WANG Zhi-hao，GAO Guo-qi，et al.//Medical Innovation of China，2013，10（26）：142-144
【Abstract】 Objective： To study Malian saddle 75% ethanol extract of the root macroporous resin column 60% ethanol elution the chemical constituents. Method： Used such as silica gel Column chromatography， ODS column chromatography and preparative high performance liquid separated means to separate the chemical components， and then by NMR determined its chemical structure. Result： The isolated three white powder compounds； NMR chart determine if it was a cardiac glycosides. The three compounds were 6-O-acetylperiplogenin （1）， periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2）， digitoxigenin gentiobioside （3）， where in the compound 1 was a species within the first minute. Conclusion： The method Malian chemical constituents of the saddle has a good application value. Can be applied to the further development of Malian saddle
【Key words】 Malian saddle； Chemical composition； Extraction； Structure identification
First-author’s address：Jilin Jichun Pharmaceutical Co.， LTD，Siping 136504，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.26.069
马莲鞍（Streptocaulon griffithii）隶属于萝藦科（Asclepia-daceae）杠柳亚科（Subfam Periplocoideae K. Schum.）马莲鞍属（Streptocaulon Weight et Am）植物[1]，生于山野坡地、山谷疏林中或路旁灌木丛中。在我国主产于广西，贵州、云南等地[2]。马莲鞍作为傣药的常用药材，用于治疗痢疾、湿热腹泻、心胃气痛、感冒发热、慢性胃炎、跌打损伤等多种病症[3]。相关研究报道表明，其乙醇提取浸膏经高通量筛选，结果是中等及大极性部分对α-葡萄糖苷酶抑制剂（针对治疗糖尿病）及5-脂氧合酶（针对治疗哮喘及过敏性炎症），均表现出了较好的活性[4]。
马莲鞍的化学成分主要有强心苷类、三萜类、甾醇类及半萜类等，其中强心苷类化合物为见于文献报道最多的化合物。本文对该属植物马莲鞍75%乙醇提取物的大孔树脂柱60%乙醇洗脱物的化学成分进行了研究[5]。
1 马莲鞍60%乙醇洗脱部位的化学成分分离
对马莲鞍75%乙醇提取物经过大孔吸附树脂柱富集得到的60%乙醇洗脱部位（图1）的化学成分进行了研究，利用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、制备液相等分离手段[6]，从中分离得到了3个化合物，采用核磁共振波谱法确定了其化学结构，分别为：16-O-acetylperiplogenin （1）， periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2），digitoxigenin gentiobioside （3），其中，化合物1为种内首分。
1.1 仪器与材料 仪器：核磁共振仪：Brucker ARX-300 MHz型超导核磁共振仪（TMS内标）；液相色谱仪：Shimadzu LC-10AT VP （SPD-10AVP UV-VIS detector）；色谱数据工作站：N2000（浙江大学智能信息工程研究所）；分析色谱柱：Kromasil 5μC18，250 mm×4.6 mm；制备色谱柱：Kromasil 5μC18，250 mm×10 mm。试剂：NMR用氘代试剂，北京腾达远科技有限公司产品（美国CIL产品，国内分装）；HPLC所用均为色谱纯，二次重蒸水自制，其它试剂均为分析纯；凝胶：Sephadex LH-20；大孔吸附树脂：HPD-100型（天津海光化工有限公司）；柱层析硅胶（100～200目，200～300目）与制备用硅胶GF254：青岛海洋化工厂产品。
1.2 分离流程 马莲鞍根30 kg，75%乙醇加热回流提取，提取物浓缩至无醇味，调密度1.07，上样于HPD100大孔吸附树脂柱，分别以水、30%乙醇、60%乙醇洗脱，得到60%乙醇洗脱物（315 g）上样于硅胶柱色谱，以石油醚：乙酸乙酯（5：1）、（2：1）、（1：1），二氯甲烷：甲醇（30：1）、（20：1）、（10：1）、（5：1）、（1：1）梯度洗脱。二氯甲烷：甲醇30：1洗脱物经过硅胶柱层析，二氯甲烷：甲醇（25：1）、（23：1）、（20：1）、（18：1）、（10：1）洗脱得到5个馏分。
Fr.1经过硅胶柱层析，石油醚：乙酸乙酯1：4洗脱后，经开放ODS反相柱层析，甲醇：水（40：60）洗脱物经高效液相制备，甲醇：水（55：45）为流动相，得到化合物1（6 mg）。
Fr.2经过硅胶柱层析，石油醚：丙酮（1：1）洗脱物，经高效液相制备，以甲醇：水（60：40）为流动相，得到化合物2（3 mg）。
Fr.3依次经过硅胶柱层析（二氯甲烷：甲醇8：1）、开放ODS反相柱层析（甲醇：水60：40）、硅胶柱层析（乙酸乙酯：甲醇5：1）、高效液相制备（甲醇：水50：50）得到化合物3（4 mg）。
2 结构解析与鉴定
2.1 结构解析 化合物1为白色粉末。Kedde试剂TLC显色为紫红色，提示其可能为含有不饱和五元内酯环，为强心苷类化合物。1H-NMR中，可见H5.97（1H，s），H4.98（1H，d，J=18.0），H4.97（1H，d，J=18.0），这三组信号指示该化合物为甲型强心苷。H4.13（1H，brs），H5.46（1H，td，J=2.4，9Hz）处的质子信号，推测其为连氧次甲基氢信号。H0.94（6H，s）推测为18、19位两个甲基氢信号。在13C-NMR中，共给出25个碳信号，C85.7，77.0，76.8，70.0为4个连氧碳信号。C177.6，171.9，122.7，78.0为不饱和五元内酯环的碳信号。C172.5，21.3，H1.94（3H，s）推测为一个乙酰基信号。与periplogenin相比较，其主要差异在于C-15，C-16，C-17，C-20，C-22的化学位移，推测16位的碳被羟基取代且羟基发生乙酰化，致使C-15，C-16，C-17的化学位移向低场移动。
与文献[7]对比后，上述核磁数据与16-O-acetylperiplogenin基本一致，故鉴定化合物1的结构为16-O-acetylperiplogenin。
化合物2为白色粉末。Kedde试剂TLC显色为紫红色，提示其可能为强心苷类化合物。1H-NMR谱数据H5.88，H4.92和H4.80，指示化合物2为甲型强心苷，H3.96处推测为一个连氧次甲基质子信号，H4.92（d，J=9.3）为糖端基质子信号，提示连接一个糖。在13C-NMR中，C96.5，38.1，68.0，72.8，69.5，18.1与文献对比后归属为洋地黄毒糖。
与文献[8]对比后，化合物2的波谱数据与periplogenin 3-O-β-digitoxoside基本一致，故鉴定其结构为periplogenin 3-O-β-digitoxoside。
化合物3为白色粉末。Kedde试剂显色为紫红色，提示其可能为强心苷类化合物。1H-NMR谱可见信号H5.90，H4.97和H5.03，指示化合物3为甲型强心苷，H4.08处有一个质子信号，推测为3位连氧次甲基氢信号。H4.31（d，J=7.8）和H4.39（d，J=7.7）处出现为两个糖端基质子信号，提示该化合物连有两个糖。在13C-NMR中，共给出35个碳信号，C104.8，75.1，78.0，71.6，78.0，62.8和C102.9，75.1，78.1，71.6，77.1，69.7为两个葡萄糖上的碳信号，从C69.7发生7ppm苷化位移推测两个葡萄糖的连接顺序为1→6连接。
上述波谱数据与文献[9]对比后，与digitoxigenin gentiobioside基本一致，故鉴定化合物3的结构为digitoxigenin gentiobioside。
2.2 结构鉴定数据 （1）化合物1 16-O-acetylperiplogenin白色粉末。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）：H5.98（1H，s，H-22），H4.98（1H，d，J=18.0 Hz，H-21），H4.97（1H，d，J=18.0 Hz，H-21），H2.73（1H，m，H-17），H0.93（3H，s，H-19），H0.94（3H，s，H-18），H4.13（1H，m，H-3），H5.46（1H，td，J=2.4，9Hz，H-16），H1.94（3H，s，CH3），13C-NMR。
（2）化合物2 Periplogenin 3-O-β-digitoxoside白色粉末。1H-NMR（CDCl3，600MHz）：H5.88（1H，s，H-22），H4.92（1H，dd，J=18.0 Hz，1.8 Hz，H-21），4.80（1H，dd，J=17.9 Hz，1.8 Hz，H-21），H2.79（1H，m，H-17），H0.93（3H，s，H-19），H0.88（3H，s，H-18），H3.96（1H，m，H-3），H4.92（1H，d，J=9.3 Hz，H-1’），13C-NMR。
（3）化合物3 Digitoxigenin gentiobioside白色粉末。1H-NMR（CD3OD，300MHz）：H5.90（1H，s，H-22），H 4.97（1H，dd，J=18.0 Hz，1.4 Hz，H-21），5.03（1H，dd，J=18.0 Hz，1.4 Hz，H-21），H2.79（1H，m，H-17），H0.96（3H，s，H-19），H0.88（3H，s，H-18），H4.08（1H，m，H-3），H4.31（1H，d，J=7.8 Hz，H-1’），H4.39（1H，d，J=7.7 Hz，H-1’’），13C-NMR。
3 结果
本文对马莲鞍（30 Kg）经75%乙醇提取后，采用大孔吸附树脂进行洗脱，其中60%乙醇洗脱部分经分离得到3个化合物，应用核磁共振波谱法进行结构确证，确定其为强心苷类化合物，分别为16-O-acetylperiplogenin（1），periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside（2），digitoxigenin gentiobioside（3）， 其中，化合物1为种内首分。
4 讨论
马莲鞍隶属萝藦科杠柳亚科马莲鞍属植物，近年来的研究表明，马莲鞍属植物具有良好的多方面药理活性，具有广阔的开发前景[10]。而目前对该植物进行研究的相关报道较少，因此对该植物进行系统的化学成分研究具有十分重要的意义。
马莲鞍的化学成分主要有强心苷类、三萜类、甾醇类及半萜类等[11]。其中强心苷类化合物为见于文献报道最多的化合物。
本文应用硅胶色谱柱、ODS色谱柱等通过梯度洗脱进行分离，通过核磁共振图谱进行分析，Kedde试剂TLC显色为紫红色，提示其可能为强心苷类化合物。并进行了归属，与文献对比后确定了化学结构。
马莲鞍作为傣药的常用药材[12]，用于治疗痢疾、湿热腹泻、心胃气痛、感冒发热、慢性胃炎、跌打损伤等多种病症[13]。本文对该属植物马莲鞍75%乙醇提取物的大孔树脂柱60%乙醇洗脱物进行了化学成分的分离和结构分析，方法准确、可靠，为马莲鞍的进一步研究提供依据。
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（本文编辑：陈丹云）
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