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摘要：观察5种贵州常用农药(敌敌畏、敌杀死、甲氰菊酯、氰戊菊酯、乙酰甲胺磷)对贵阳腐霉菌丝生长的抑制作用，计算出各农药在SFE培养基上分别抑制贵阳腐霉菌丝体生长率10％和50％的浓度(IC10和IC50)；并采用生物测定方法，测定这5种农药对本实验室饲养的致倦库蚊半数致死浓度(LC50)。结果表明，敌杀死对贵阳腐霉的毒力最强(IC50值最小)，其余按毒力递减排列为：甲氰菊酯、敌敌畏、乙酰甲胺磷、氰戊菊酯；LCC50值的比较说明，敌杀死对致倦库蚊的毒力最强，其余按毒力递减排列为：敌敌畏、甲氰菊酯、氰戊菊酯、乙酰甲胺磷；并且这5种农药对致倦库蚊的LCC50远低于其对菌丝体的IC50。
关键词：贵阳腐霉；农药；蚊虫；综合治理
中图分类号：S481.9文献标识码：A文章编号：1006—6500{2008)03—0047—04
蚊虫是重要的医学昆虫之一。它不但能叮刺、吸血、骚扰人群，影响正常生活，还是多种病原体的传播媒介，严重危害人畜健康。常见蚊媒病有疟疾、丝虫病、登革热、流行性乙型脑炎等，除上述外，还有黄热病、西尼罗热、东方马脑炎、西方马脑炎、委内瑞拉马脑炎、圣路易脑炎、基孔肯雅热等。
控制蚊媒病的关键环节是治疗病人和防治蚊虫。到目前为止，防治蚊虫的主要手段还是使用化学杀虫剂。然而，经过半个多世纪的大面积无节制使用化学合成杀虫剂所带来的“3R”问题，即：Resistance(抗性)、Residues(残留)、Resurgence(再猖獗)日益突出，严重污染环境，破坏生态环境、危害人类的健康生存。化学农药给世界经济造成的直接和间接损失是惊人的。我国化学合成杀虫剂的使用量也在世界前列。化学防治蚊虫的危害被逐渐认识，因此，从20世纪末期，蚊虫防治开始走上了综合治理的道路。其中采用蚊虫病原微生物防治蚊虫的方法越来越得到重视。但是目前能用于蚊虫防治的微生物种类有限。为适应不同生态环境，针对不同媒介蚊虫的控制的需要，必须大力开发新的灭蚊微生物。
贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)是苏晓庆教授1994年在贵阳医学院土壤中分离得到的一株灭蚊真菌，属于鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、腐霉科、腐霉属。经过十几年的观察和大量的试验已证明贵阳腐霉具有灭蚊能力强、灭蚊谱广、繁殖速度快、易于人工培养、可移植性强、对非靶生物相对安全、能耐受的酸碱范围广、还能耐受贵阳地区的极端温度(-4～35℃)等诸多优点，是一株极具开发前景的生物灭蚊真菌，并得到国家发明专利保护(专利号ZL 200510003027.7)。
贵阳腐霉是在蚊虫孳生的水体中起作用。但由于农业上广泛使用的农药可被雨水或灌溉水带到蚊虫孳生的水体中，从而可能对其中的贵阳腐霉产生影响。水体中的农药浓度可能变异很大，而且多数情况下可能受到稀释。但是如果农药使用量过多，次数频繁，会使水体中农药含量增多。为了解含农药的水环境中贵阳腐霉可能出现的情况，本研究重点观察了5种贵州常用农药(主要是菊酯类和有机磷两大类)对贵阳腐霉的影响。同时也观察了致倦库蚊幼虫对这些农药的敏感性。
1 材料和方法
1.1 材料
贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)是1994年在贵阳医学院土壤中分离的，经转化后接种于SFE(葵花籽抽提物)培养基和KPYG2培养基的培养皿中，每5～7d转种一次，每3个月复壮并保种一次，培养于(25+1)℃的恒温培养箱中。
本研究所用的5种农药皆为市场销售产品。敌敌畏：含量80％乳油，四川省好利尔生物化工有限公司生产。敌杀死：含2.5％溴氰菊酯乳油，四川福建农用化工有限公司分装。甲氰菊酯：含量20％，江西施普润农化有限公司生产。氰戊菊酯：含量20％乳油，甘肃省华实农业科技有限公司生产。乙酰甲胺磷：含量30％，重庆农药化工有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 5种农药对贵阳腐霉菌丝体生长的影响
(1)农药浓度的选定。对敌敌畏、敌杀死、甲氰菊酯、氰戊菊酯4种农药，在推荐浓度的50％～200％范围内，设立多个浓度进行观察，最终筛选一个最佳浓度作为自定义浓度，以这个自定义浓度的10％～200％之间设5个浓度进行观察。而在乙酰甲胺磷的推荐浓度中菌丝体不能生长，所以在推荐使用浓度的10％～20％范围内，设立一个自定义浓度，经加入培养基后使其终浓度分别达到自定义浓度的50％，75％，100％，150％，200％。选取这5个浓度进行观察。
(2)试验设计。按传统方法制备SFE琼脂培养基，高压灭菌20min，移入无菌超净台中，待烧瓶温度下降到40～50℃时，迅速用微量移液器向各分装烧瓶中加入用无菌双蒸水稀释的不同浓度的农药，迅速倒平板(直径90mm、厚度2mm)备用。每一种农药的每一个浓度观察3个培养。各组均设无农药对照组，重复3次。将载有生长3～5d贵阳腐霉菌丝体的无农药SFE琼脂培养基，在无菌条件下切取1cm×cm2琼脂块，菌丝体向下，接种于已准备好的不同农药浓度的平板上，置(25±1)℃培养，并分别于第2，3，4天测量菌斑直径(mm)，以该直径的平均增长速度(mm/d)表示菌丝的生长速度。
(3)数据处理。试验共计观察了270个培养皿，获得810个测量数据，全部用SPSS统计软件处理。计算出无农药对照组中菌丝平均生长速度及每种农药在各种浓度中菌丝平均生长速度，再按下式计算出试验组的菌丝生长平均抑制率(IRA)。
抑制率(％)=[(对照组菌丝体平均生长速度一试验组菌丝体平均生长速度)×100]÷对照组菌丝体平均生长速度
求出每种农药的菌丝平均抑制率与浓度对数(log10)的回归方程，再分别求出各农药对SFE培养基中贵阳腐霉菌丝体生长抑制10％和50％的浓度估计值，即：IC10和IC50。
1.2.2.5 种农药对致倦库蚊(Culex quinquefaciatus Say)的毒力测定蚊虫培养条件为温度(25±1)℃，RH64％，光照L：D=14h：10h，幼虫食物为兔肝粉。试验用致倦库蚊皆为晚2龄或早3龄的幼虫。由于各农药的毒力不一样，对各农药选定一个自定义浓度，并分别在自定义浓度的1/20000～1/100范围内各取5个不同的浓度作为测试浓度。
取一次性水杯，每组试验3杯，每杯放100mL过夜自来水、20只致倦库蚊幼虫、4％新鲜兔肝粉悬液6滴、各组加入各农药使其达到预定的测试浓度。并设立空白对照组，置于(25±1)℃，连
续观察3d，记录死亡数，计算校正死亡率，绘制死亡率曲线，求出不同农药对致倦库蚊的LC50。
2 结果与分析
由表1可知，敌杀死对贵阳腐霉的IC10o和IC50最低，说明它对贵阳腐霉的毒力最高。其余按毒力递减排列为：甲氰菊酯、敌敌畏、乙酰甲胺磷、氰戊菊酯。5种农药对贵阳腐霉的IC50大多数低于其推荐使用浓度(表1)。农药对致倦库蚊的LC50又远低于其对贵阳腐霉菌丝体的IC50。其中敌杀死对致倦库蚊的LC50还不到抑制贵阳腐霉菌丝体IC50的0.1％(表2)。
3 结论
农药是灭蚊真菌贵阳腐霉将要面临的重要环境因素之一。Merriam和Axtell曾观察了15种美国常用的杀虫剂、除真菌剂和除草剂对著名灭蚊真菌大链壶菌NC和LA分离株的抑制作用。邹复诊和苏晓庆也观察了6种贵州常用农药对大链壶菌的影响。为大链壶菌的田间使用提供了重要的环境因素的参考资料。本研究采用贵州普遍使用的5种农药进行试验，观察它们对贵阳腐霉的影响。结果表明，贵州常用的这5种农药对贵阳腐霉都有抑制作用。这对于将来贵阳腐霉的实际应用有重要的参考价值。
所观察的5种农药对贵阳腐霉菌丝体的IC50大多数低于其推荐使用浓度，即如按推荐浓度施用这些农药，将对环境中的贵阳腐霉起明显的抑制作用。
在农药灭蚊试验中观察到这些农药对蚊幼虫的LC50远低于其对贵阳腐霉的抑制浓度，说明这几种农药在施用很低的浓度时就可以杀死蚊虫而不影响贵阳腐霉。这为制备既含少量可以快速击倒蚊虫的化学杀虫剂，又含对生态友好的可以长期制约蚊虫的贵阳腐霉的配方灭蚊剂提供了理论依据。
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