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摘 要：本文通过GC-MS联用技术建立了一种高效准确的检测红薯中克百威、3-羟基克百威残留的方法。样品经乙腈萃取、TPT固相萃取柱净化后，利用GC-MS 检测。结果表明：预处理后样品中克百威、3-羟基克百威GC-MS保留时间分别为5.758 min、8.542 min，在加标量分别为0.2、0.4、0.6 μg/mL 时，其平均回收率在80%～115% ，相对标准偏差（RSD）<10% 。该方法在0.1～0.5 μg/mL范围内具有较好的线性关系（ R2>0.997） ，最低檢测限（LOD）为0.000 5 mg /kg，定量限（LOQ）为0.001 6 mg/kg。该研究为红薯中克百威、3-羟基克百威残留提供了一种简便快速有效的检测方法。
关键词：克百威;3-羟基克百威;GC-MS;红薯;残留
克百威又称呋喃丹，是一种氨基甲酸酯类杀虫剂和杀线虫剂[1]。按中国农药毒性分级标准，克百威为高毒农药，农业部199号公告禁止克百威在蔬菜、果树、茶叶和中草药材上使用[2]。《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》（GB 2763-2016）中规定，其残留物为克百威和3-羟基克百威之和，以克百威表示，在蔬菜水果中的最大残留限量为0.02 mg/kg[3]。
目前，对于克百威和3-羟基克百威残留检测已有诸多研究，罗俊凯等建立了气相色谱-质谱法同时检测烟叶和土壤中丁硫克百威及其代谢产物（克百威和3-羟基克百威）残留量的分析方法[4];赵桦林建立了加速溶剂萃取-液相色谱-串联质谱法同步检测白菜中丁硫克百威及其代谢物克百威、3-羟基克百威和3-酮基克百威[5]。李军采用高效液相色谱-紫外检测法同时测定了土壤中多菌灵、灭多威和克百威的残留量[6]。侯翠丽建立了浓缩菠萝汁中克百威及其代谢产物3-羟基克百威残留量的液相色谱串联质谱分析方法[7]。
检测基质包括了辣椒、黄瓜、豇豆、番茄、苹果、葡萄、草莓、蜂蜜、小麦、水稻和土壤等，其中红薯作为克百威主要施用的蔬菜之一，其残留的检测至今未有报道。测定克百威没有气相色谱-质谱国标方法，本试验建立了红薯中克百威和3-羟基克百威残留检测的气相色谱-质谱法，通过乙腈萃取样品，TPT固相萃取柱净化，利用GC-MS检测，以期为红薯中克百威及其代谢产物3-羟基克百威残留量检测提供一种快速有效的方法，并对梅州市及周边县区等25个超市及菜市场的红薯进行随机抽样检验，进行风险监测。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
红薯样品（梅州市喜多多、乐万家、华建市场等20多个超市及农贸市场）;克百威标准品（农业部环境保护科研监测所GSB05-2300-2008）;3-羟基克百威标准品（农业部环境保护科研监测所GSB05-1861-2016）;乙腈、正己烷（Anaqua chemicals supply，色谱纯）;丙酮（Honeywell，色谱纯）;氯化钠（广州化学试剂厂，优级纯）;无水硫酸钠（天津市科密欧化学试剂有限公司，优级纯）。
TPT固相萃取柱;岛津气相色谱仪（2010PLUS）;岛津QP-2010质谱仪;气相色谱柱DB-1701（美国安捷伦公司）;固相萃取仪、氮吹仪（北京莱伯泰科股份有限公司）;漩涡仪（上海泸西分析仪器有限公司）;摇床（金坛市宏华仪器厂）;离心机（湘鹰TD5A-WS台式低速离心机）。
1.2 标准溶液的配制
准确吸取100 μg/mL的克百威和3-羟基克百威标准品，用丙酮定容至10 mL，配制成10 μg/mL标准储备液，置于-18 ℃保存。以空白红薯基质将标准储备液稀释成浓度分别为 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL的克百威和3-羟基克百威标准工作溶液。
1.3 样品的提取和净化
1.3.1 样品提取
称取10.0 g（精确至0.001 g） 样品置于100 mL离心管中，加入40 mL乙腈后于振荡器上振荡提取30min，过滤至加有6.0～8.0 g NaCl的离心管中，旋涡1 min，4 000转离心5 min，取上清液于10 mL至氮吹管中，氮吹浓缩至近干，加入1 mL丙酮溶解待净化。
1.3.2 净化
用5 mL甲醇∶二氯甲烷（1∶99）活化TPT固相萃取柱，弃去淋洗液，将样品溶液转移至固相萃取柱中，用10 mL甲醇∶二氯甲烷（1∶99）分3次洗脱固相萃取柱，合并洗涤液于氮吹管中，氮吹至近干，加丙酮定容至1.0 mL，过0.22 μm 滤膜，上机。
1.4 仪器条件
载气为高纯氦气（ 99.999 % ）;进样方式为不分流进样;色谱柱为DB-1701石英毛细管柱;接口温度220 ℃;进样口温度220 ℃。柱温箱：程序升温，初始120 ℃，再以每分钟10 ℃升至220 ℃，再以每分钟5 ℃升至250 ℃，保持8 min，再以每分钟20 ℃升至280 ℃，保持5min。进样量 1.0 μL。电子轰击电离源（EI），离子源温度250 ℃;溶剂延迟4 min。
1.5 回收率、检测限和定量限的确定
向空白红薯样品中分别添加0.2、0.4、0.6 μg/mL的克百威和3-羟基克百威标准溶液测定其回收率，重复3次并计算相对标准偏差（RSD）。以不含克百威和3-羟基克百威的空白红薯样品作为基质，配制不同浓度梯度的克百威和3-羟基克百威的标准溶液，以3倍的最低浓度比信噪比确定该方法的检出限，以10倍的最低浓度比信噪比作为定量限。
2 结果与讨论
2.1 样品前处理条件的优化
提取条件优化：本研究比较了振荡和均质2 种提取方式，分别为振荡提取30 min、均质提取1 min。结果表明：震荡提取与均质提取平均回收率均在80%～110 %，差异不显著（P> 0.05）。均质提取操作危险，耗时耗力。振荡提取操作简便，适合大批量样品，由此本研究选择振荡30 min作为克百威和3-羟基克百威的提取方式。
固相萃取柱的选择：本研究首先对Florisil、TPT和氨基柱3种固相萃取柱分离萃取克百威和3-羟基克百威的效果进行了对比。结果表明：TPT固相萃取柱去除杂质和色素的效果明显优于Florisil和氨基固相萃取柱，平均回收率均在90%～100%，差异不显著（P>0.05）。因此选用TPT固相萃取柱进行实验。
洗涤液的选择：测定农药残留时，样品前处理多采用乙腈∶甲苯（3∶1）萃取。本研究对乙腈∶甲苯（3∶1）、甲醇∶二氯甲烷（1∶99）这两种洗涤剂进行了对比，分别计算相应的克百威和3-羟基克百威回收率。结果表明，采用乙腈∶甲苯（3∶1）和甲醇∶二氯甲烷（1∶99）这两种洗涤剂回收率接近，无显著性差异（P>0.05），由于甲苯毒性较强且乙腈∶甲苯（3∶1）在氮吹过程中耗时长，需多次溶剂交换，残留的乙腈会损坏色谱柱，因此选用甲醇∶二氯甲烷（1∶99）作为TPT柱的洗涤剂。
2.2 检测条件的优化
进样口的温度要高于被分析物的沸点，确保样品组分不会在进样口滞留从而影响对农药残留分析的准确性[8]，经过预实验确定进样口温度为220 ℃。对不同程序升温速率进行比较，发现升温速率越快，目标物和杂峰分离度变差，但为达到分析检测时间较短、灵敏度较高等试验效果，最终确定升温程序，见表1。
在选定的检测条件下，首先通过全扫描监测方式，对克百威和 3-羥基克百威进行定性分析，并选择特征监测离子，之后使用SIM模式，对其进行定量分析，如图1、图2所示。
2.3 基质效应
基质的存在可能增强或抑制离子强度。用红薯空白样品经过乙腈提取、TPT净化前处理过程，得到空白基质提取液，分别用丙酮溶液和空白样品溶液稀释标准溶液，进行气相色谱-质谱法对比分析。结果显示克百威ME = 1.15 > 1，3-羟基克百威ME = 1.26 > 1，表明克百威和3-羟基克百威均存在不同程度的基质增强效应。为了消除基质效应的影响，采用基质标准工作曲线进行定量计算。
2.4 方法的线性关系及检出限
以质量浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL的克百威和3-羟基克百威标准品的浓度为横坐标，以各自峰面积为纵坐标计算回归方程，制作标准曲线，如图3、图4所示。
克百威线性关系Y = 172388.0X - 8122.001，相关系数R2 = 0.9982。
3-羟基克百威线性关系Y = 65182.0X - 30.50014，相关系数R2 = 0.9995。
在克百威和3-羟基克百威的空白红薯样品中，添加不同浓度的克百威和3-羟基克百威标准溶液，以3倍的最低浓度比信噪比确定该方法的检出限为0.000 5 mg/kg，以10倍的最低浓度比信噪比确定该方法的定量限为0.001 6 mg/kg。
2.5 回收率和精密度
在样品中分别加入0.2、0.4、0.6 μg/mL的克百威和3-羟基克百威标准溶液，在优化的处理条件下对克百威和3-羟基克百威残留进行测定计算，克百威平均回收率分别为85.34 %、89.65 %、110.78 %，相对标准偏差为8.14 %、4.10 %、4.80 %，3-羟基克百威平均回收率分别为97.17 %、89.74 %、101.69 %，相对标准偏差为3.19 %、5.95 %、2.32 %，符合农药残留检测的要求。添加回收率及相对标准偏差结果见表2。
2.6 实际小麦样品的测定
实验选取梅州市及周边县区等25个超市及菜市场的红薯作为样品，分别按上述方法对样品进行检测分析，结果表明有两份样品检出克百威残留。根据GB 2763规定的块茎类蔬菜中克百威和3-羟基克百威的最大残留限量为0.02 mg/kg，红薯样品的测定结果显示，2份样品中检测出克百威为0.006 mg/kg和0.008 mg/kg，含量均小于限量0.02 mg/kg，因此本次抽检的红薯样品均合格。
3 结论
运用GC-MS 技术，建立了红薯中克百威和3-羟基克百威残留量的分析方法。该方法优化了红薯前处理过程，采用TPT固相萃取柱净化，并以甲醇∶二氯甲烷（1∶99）为淋洗液可以提高实验效率，达到对农药残留准确分析的目的。对空白样品进行添加回收实验，克百威和3-羟基克百威的平均回收率在80 %～115 %，相对标准偏差（RSD）<10 % ，最低检测限为0.000 5 mg /kg，定量限为0.001 6 mg/kg，满足农药残留分析的要求。本文首次利用气相色谱-质谱联用技术对红薯中克百威和3-羟基克百威残留量进行测定分析，此方法样品前处理过程简便、快捷，实现了样品的自动化分析且检测灵敏度好，适用于红薯克百威和3-羟基克百威残留的定性和定量测定，从而为红薯中克百威和3-羟基克百威残留量的检测提供了一种简便有效的方法。
参考文献
[1]侯志广，王秀梅，范志先，等.气质发测定白菜中克百威残留量的研究[J].吉林农业大学学报，2004，26（1）：70-72.
[2]方宗壮，谢艳丽，王萌，等.气相色谱-质谱法测定豇豆中丁硫克克百威，克百威和3-羟基克百威的残留[J].保鲜与加工，2016，16（5）：94-99.
[3]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局，农业部.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量：GB 2763-2016[S].北京：中国标准出版社，2016.
[4]罗俊凯，龚道新，丁春霞，等.气相色谱-质谱法测定烟叶和土壤中丁硫克百威及其代谢产物的残留[J].农药学学报，2014，16（1）：66-71.
[5]赵桦林，邱静，王敏，等.加速溶剂萃取-液相色谱-串联质谱测定白菜中的丁硫克百威及其代谢物残留[J].农药学学报，2013，15（2）：204-210.
[6]李军，顾亚南，里冠华，等.高效液相色谱法同时快速测定土壤中多菌灵-灭多威和克百威的残留[J].环境研究与监测，2018，31（2）：31-33.
[7]侯翠丽，唐媛媛，马新华，等.UPLC-MS-MS法测定浓缩菠萝汁中的克百威及3-羟基克百威[J].福建热作科技，2017，42（3）：28-32.
[8]徐敬国，杨雨蒙，胡伊旻，等.GCMS法测定小麦中硅噻菌胺的残留量[J].食品工业科技，2017（19）：236-244.
作者简介：聂荣荣（1988—），女，内蒙古乌兰察布盟，硕士研究生，质量工程师。研究方向：食品检验。
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