[摘要] 目的 观察乳铁蛋白（LF）对经脂多糖（LPS）刺激的人牙周膜细胞（hPDLCs）表达Toll样受体4（TLR4）的影响。方法 采用组织块酶消化法培养hPDLCs，鉴定后取第4代细胞，分成空白对照组、LPS组、LPS+LF组。空白对照组不加任何刺激，LPS组加入0.1 μg·mL-1 LPS；LPS+LF组在加入0.1 μg·mL-1 LPS 2 h后，加入10 μg·mL-1 LF。以加入LF时开始计算时间，4 h后采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测hPDLCs中TLR4 mRNA的表达，24 h后采用细胞免疫荧光染色法观察TLR4蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示：LPS+LF组TLR4 mRNA表达较LPS组明显降低（P<0.05），与空白对照组无明显差异（P>0.05）。细胞免疫荧光染色法显示：LPS+LF组TLR4蛋白的表达强度较LPS组减弱（P<0.05），与空白对照组无明显差别（P>0.05）。结论 LF可以下调LPS激发的hPDLCs中TLR4的表达，在牙周炎症TLR4信号通路的调控过程中有一定的作用。
[关键词] 乳铁蛋白； 脂多糖； 人牙周膜细胞； Toll样受体4
[中图分类号] Q 26 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2014.02.014
[Abstract] Objective To examine the role of lactoferrin （LF） on Toll like receptor 4 （TLR4） stimulated by lipopolysaccharide （LPS） in human periodontal ligament cells （hPDLCs）. Methods Primary hPDLCs were cultured by tissue block enzymolytic method. Cells obtained from four passages were identified and used in this experiment. Cells without stimulation served as the controls and cells treated with LPS （0.1 μg·mL-1） comprised the LPS group. The LPS+LF group was pretreated with LPS （0.1 μg·mL-1） for 2 h， and then treated with LF （10 μg·mL-1）. Four hours after LF stimulation， the mRNA expression levels of TLR4 were examined by real-time quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR）. The protein expression of TLR4 was observed by cell immunofluorescence staining after LF stimulation of 24 hours. Results TLR4 mRNA expression in the LPS+LF group was significantly more decreased than that in the LPS group （P<0.05）， but exhibited no difference with that in the control group （P>0.05）. Cell immunofluorescence staining showed that the protein expression of TLR4 in the LPS+LF group was significantly more decreased than that in the LPS group （P<0.05）， but exhibited no difference with that in the con-trol group （P>0.05）. Conclusion LF can decrease the expression of TLR4 stimulated by LPS in hPDLCs， thus presenting potential application for controlling the TLR4 immune pathway of periodontitis.
[Key words] lactoferrin； lipopolysaccharide； human periodontal ligament cells； Toll like receptor 4
Toll样受体家族（Toll like receptors，TLRs）是一种重要的模式识别受体，可识别保守的病原体相关的分子位点激活先天性免疫系统产生炎症细胞因子，进而启动后天性免疫系统。Toll样受体4（Toll like receptor 4，TLR4）是第一个被发现的哺乳动物的Toll样受体，可以通过经典的病原相关分子模式（pathogen association molecular pattern，PAMP）识别细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），启动细胞内信号传导，诱发细胞炎症因子分泌，启动炎症免疫反应[1-2]。牙周炎是以革兰阴性厌氧菌为主的混合感染性疾病，这些细菌能分泌大量的LPS，LPS在相关分子的协同下引发TLR4炎症信号通路，是细菌破坏牙周组织的关键途径。
乳铁蛋白（lactoferrin，LF）是一种存在于人体多种组织中的糖蛋白，具有抗细菌、真菌及病毒等特性，参与构成非特异性免疫系统，也是口腔唾液防御系统的重要组成部分[3-5]。LF可以通过干扰LPS引发的TLR4免疫反应来抑制内毒素毒性，进而抑制炎症发展。抑制LPS激发的TLR4反应从而调控相关的炎症反应，是近年来研究炎症治疗方法的热点。本研究采用实时定量聚合酶链反应（real-time quan-titative polymerase chain reaction，RT-PCR）和细胞免疫荧光染色法，检测LF对LPS引发的牙周膜细胞TLR4表达的影响，以期了解LF在牙周炎免疫治疗方面的作用。
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